| 권진숙, ê¹€ì˜í™”, 김지연, 박해남, 박서광, 황경êµ, 연태진,ê¹€ë™ìš´, 조명찬 |
목 ì : ì •ìƒê¸°ëŠ¥ì˜ ì‹¬ê·¼ì„¸í¬ ì†Œì‹¤ë¡œ 대변ë˜ëŠ” ì‹¬ë¶€ì „ì˜ ìƒˆë¡œìš´ 치료법으로서 ì„¸í¬ ì‹¬ê·¼ì„±í˜•ìˆ (cellular cardiomyoplasty)ì´ ì‹œë„ë˜ê³ 있다. ì¸ì²´ì˜ 경우는 주로 태아 줄기세í¬ì™€ ê³¨ìˆ˜ìœ ëž˜ 성체 줄기세í¬ì—ì„œ ë§Žì€ ì—°êµ¬ê°€ 진행ë˜ê³ 있지만, 보다 쉽게 ì–»ì„ ìˆ˜ ìžˆê³ , 보다 다양한 세í¬ì£¼(cell line)ì—ì„œ ì‹¬ê·¼ì„¸í¬ ë¶„í™”ê°€ëŠ¥ì„±ì— ëŒ€í•œ ì ‘ê·¼ì´ ì ˆì‹¤ížˆ 요구ë˜ê³ 있다. ì´ì— 본 연구ì—서는 ë°°ì–‘ë°©ë²•ì´ ì •ë¦½ë˜ì–´ ìžˆê³ , ë°°ì–‘ì´ ìš©ì´í•œ ì¸ì²´ ì œëŒ€ì •ë§¥-내피세í¬(HUVEC)ì˜ ì‹¬ê·¼ì„¸í¬(cardiomyocyte:CMC)ë¡œì˜ ë¶„í™” ê°€ëŠ¥ì„±ì— ëŒ€í•´ ì•Œì•„ë³´ê³ ìž í•˜ì˜€ë‹¤.
ë°© 법: ì‹ ìƒë°±ì„œ(Sprague-Dawley)ì˜ ì‹¬ì‹¤ì„ ìž˜ê²Œ 잘ë¼ì„œ collagenase II, pancreatin, 기계ì ì¸ íž˜(shaking with 40rpm)으로 소화시킨 후, Percollë¡œ 심근세í¬ì™€ 비심근세í¬ë¥¼ 분리하여 준비하였다. ì¸ì²´ì˜ ì œëŒ€ë¡œë¶€í„° HUVECì„ ì¼ì°¨ ë°°ì–‘í•œ 후 BrdU(10uM, 24hr)ë¡œ ì²˜ë¦¬í•˜ê³ , ì¤€ë¹„ëœ CMC와 HUVECì„ 4:1ì˜ ë¹„ìœ¨(CMC 4×105 : HUVEC 1×105)ë¡œ 혼합배양하였다.(DMEM /M199 [3:1] with 5% fetal calf serum, 10% horse serum). ë°°ì–‘ 2주 후 심근세í¬ë¡œì˜ 분화여부를 확ì¸í•˜ê¸° 위해 심근 íŠ¹ì´ ë‹¨ë°±ì§ˆì¸ Troponin-Iì— ëŒ€í•œ ë©´ì—ì¡°ì§í™”í•™ì—¼ìƒ‰ì„ ì‹œí–‰í•œ 후 BrdU(+) /Troponin-I(+) 세í¬ì— 대하여 관찰하였다. HUVEC(계대배양 횟수: 2∼3회)ì„ BrdU와 DAPIë¡œ í‘œì‹í•œ 후 ë°±ì„œì˜ ì •ìƒì‹¬ê·¼ì— ì§ì ‘ 근주하였다. 근주 3주 후 심장조ì§ì„ ì‹ ì„ ëƒ‰ë™ì ˆíŽ¸ìœ¼ë¡œ 만들어서 ì´ì‹ì„¸í¬ë¥¼ 확ì¸í•˜ê³ , ì‹¬ê·¼íŠ¹ì´ ë‹¨ë°±ì§ˆì¸ Troponin-I 와 MHC (myosin heavy chain)ì— ëŒ€í•´ ë©´ì—ì¡°ì§í™”í•™ì—¼ìƒ‰ì„ ì‹œí–‰í•˜ì˜€ë‹¤.
ê²° ê³¼: 1) CMC와 HUVECì˜ í˜¼í•©ë°°ì–‘(4:1)ì—ì„œ troponin-Iì˜ ì—¼ìƒ‰ê²°ê³¼ 약 5-10%ì—ì„œ troponin I 양성세í¬ê°€ 관찰ë˜ì—ˆë‹¤. ì´ëŠ” 최근 ë³´ê³ ëœ EPCì˜ CMC 분화와 비슷한 수준ì´ë‹¤. 2) ì •ìƒ ë°±ì„œì˜ ì‹¬ìž¥(n=3)ì— HUVECì„ ì´ì‹í•œ ê²°ê³¼, 3주 í›„ê¹Œì§€ë„ ì´ì‹í•œ HUVECì´ ì„±ê³µì 으로 ìƒì°©ë¨ì´ 관찰ë˜ì—ˆê³ , ë©´ì—ì¡°ì§í™”학염색ì—ì„œ troponin-I와 MHCê°€ ì¼ë¶€ì—ì„œ ì–‘ì„±ì†Œê²¬ì„ ë³´ì—¬ ê·¸ 수는 ì 지만 HUVECì´ ì´ì¢… ì´ì‹ì‹œì—ë„ ì‹¬ê·¼ì„¸í¬ë¡œ 분화하였ìŒì„ ë³¼ 수 있었다.
ê²° ë¡ : HUVECì—ì„œ CMC와 혼합배양시 ì‹¬ê·¼ì„¸í¬ í‘œí˜„í˜•(phenotype)ìœ¼ë¡œì˜ ë¶„í™”ê°€ 관찰ë˜ì—ˆê³ , ì •ìƒ ë°±ì„œì˜ ì‹¬ìž¥ì— ì´ì¢…ê°„ ì´ì‹ì‹œì—ë„ 3주 ì´ìƒ 성공ì 으로 ìƒì°©í•˜ì˜€ë‹¤. ì´ìƒì˜ ì†Œê²¬ì€ ì‹¬ê·¼ì„¸í¬ì˜ 새로운 공급ì›ìœ¼ë¡œì˜ 가능성ë¿ë§Œì´ 아니ë¼, ì´ì „ì— ì‹œë„ë˜ì—ˆë˜ ìœ ì „ìž ì¹˜ë£Œ 등과 혼용시 향후 HUVECì„ ì´ìš©í•œ 새로운 심근 ì„±í˜•ìˆ ì˜ ê°€ëŠ¥ì„±ì„ ë³´ì—¬ì¤€ë‹¤ê³ ìƒê°ëœë‹¤.
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